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Klenow Fragment

Klenow Fragment是大肠杆菌DNA聚合酶I的大片段，具有5'→3'的DNA聚合酶活性和3'→5'外切酶校正活性，但失去了5'→3'外切核酸酶活性。

特点：

• 聚合时可掺入修饰的核苷酸（如Cy3-、Cy5-、氨基、生物素、地高辛和荧光素标记的核苷酸）。

应用：

• DNA平端化，5'突出段补平。
• 随机引物DNA标记。
• 第二链cDNA合成。
• Sanger方法DNA测序。

来源：
从带有编码DNA聚合酶I基因的 E.coli polA菌株中提取，并利用基因重组技术，使用 E.coli表达和纯化Klenow Fragment。

活性单位定义：
在37°C条件下，30分钟内能使10 nmol 的dNTPs掺入酸不溶性物所需要的酶量定义为1个活性单位。

保存条件：
-20℃保存。

抑制和失活：
抑制剂：金属离子螯合剂，无机焦磷酸盐(PPi)，大剂量的无机磷酸盐(Pi)。
失活：75°C 20分钟。

质量控制：
相关测试表明无内切脱氧核糖核酸酶污染。

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