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Klenow Fragment(3’→5’ exo-)

 Klenow Fragment(3'→5' exo-)是大肠杆菌DNA聚合酶I的蛋白水解产物,具有5'→3'的DNA聚合酶活性,但失去了5'→3'外切核酸酶活性。该酶经突变 (D355A, E357A) 去除了其3'→5'的外切核酸酶活性,所以不适用生成平末端的反应。

特点

  • 缺乏3'→5'外切核酸酶活性。
  • 聚合时可掺入修饰的核苷酸(如Cy3-、Cy5-、氨基、生物素、地高辛和荧光素标记的核苷酸)。

应用

  • 随机引物法DNA合成。
  • 双链DNA 5'突出(5' overhang)末端的标记。
  • 双脱氧法DNA序列测定(Sanger法)。

来源
从带有编码DNA聚合酶I基因的 E.coli polA菌株中提取,并利用基因重组技术,使用 E.coli表达和纯化Klenow Fragment(3'→5' exo-)。

活性单位定义
在37°C条件下,30分钟内能使10nmol 的dNTPs掺入酸不溶性物所需要的酶量定义为1个活性单位。

保存条件
-20℃保存。

抑制和失活
抑制剂:金属离子螯合剂,无机焦磷酸盐(PPi),大剂量的无机磷酸盐(Pi)。
失活:  75°C 20分钟。

质量控制
相关测试表明无内切和外切脱氧核糖核酸酶污染。


订购信息:  

编号

单位活性

包装

配套提供

EN1001S

5U/ul

200U

10×Reaction Buffer

EN1001L

5U/ul

1000U

10×Reaction Buffer